NY_T 829-2004 牛奶中氨苄青霉素残留检测方法——HPLC
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ID： |
3FF56B20D83042ED8731D6220DE8FE29 |
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文件大小(MB)： |
0.38 |
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9 |
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日期： |
2024-8-13 |
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ICS 67.050,X 04,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 829—2004,牛奶中氨茱青霉素残留检测方法,---- HPLC,Determination of ampicillin residue in milk:,HPLC,2004-08-25 发布2004-09-01 实施,中华人民共和国农业部发布,NY I 829—2004,A,言,本标准的附录A为资料性附录,附录B为规范性附录ー,本标准由中华人民共和国农业部提出并归口,本标准起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心（广州）,本标准主要起草人:罗道栩、曾平、肖田安、邓国东二,NY/T 829—2004,牛奶中氨苦青霉素残留检测方法,——HPLC,本标准规定了牛奶中氨苇青霉素残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法,本标准适用于牛奶中氨苇青霉素的残留量检测,2规范性引用文件,下列文件中的条款通过标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的,修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是,否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准,GB/F6682分析实验室用水规格和试验方法,3制样,3.1 样品的制备,取适量新鲜或室温下解冻的冷冻空白或供试牛奶,3.2 样品的保存,-20℃以下冰箱中贮存备用,4测定方法,4.1 方法提要或原理,试样先经三氯乙酸溶液沉淀蛋白,上清液中的氨芾青霉素与甲醛在酸性条件下，加热生成2ー羟基一3-,苯基一6一甲基毗嗪(氨苇青霉素荧光衍生物),该衍生物用带有荧光检测器的高效液相色谱在激发波长,(Ex) 346 nm、发射波长(り“)422 nm条件下测定,外标法定量,4.2 试剂和材料,以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂I;水为符合GB/T6682规定的二级水,4.2.1 氨芳青霉素标准品,含氨芳青霉素(CeHigNNaO'S)不得少于85.0%,4.2.2,4.2.3,4.2.4,4.2.5,4.2.6,4.2.7,乙睛色谱纯,三氯乙酸,甲醛溶液,浓磷酸,磷酸二氢钾,磷酸盐缓冲液(0.02mol/L,pH3.5),称取2.7218 g磷酸二氢钾,置于1 000 mし容量瓶中,加水900 mL使溶解,再用浓磷酸调pH至3.5 土,(). 05,加水稀释至刻度,摇匀即得,NY/T 829—2004,4.2.8 三氯乙酸水溶液(2(Wmg/mL),称取ー:氯乙酸2() g,溶于8() mL水中,加水稀释至100 n】L.推勻即得,4.2.9 三氯乙酸水溶液(750 mg/mL),称取ー氯乙酸75 g,加水适量,使溶解,并稀释至100 mL,摇匀即得,4.2.10 7%甲醛水溶液,量取37%甲醛18.9 mL,加水至1()() mL,摇匀即得「,4.2.11 20%乙晴水溶液,量取20 mし乙睛至100 mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀即得,4.2.12 氨芳青霉素标准贮备液(1 000 rig/mL),准确称取氨芾青霉素标准品约0.115 5 g,置100 mし容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,制成1 ()00,己理/mし标准贮备液,置于4℃冰箱中保存,存放期为1周,4.2.13 氨苦青霉素标准工作液,精密量取氨卡青霉素标准贮备液适量,用水稀释成适宜浓度的标准溶液(0.001 mg/mL.0.100 Mg/,mL),即得:临用前配制,4.3 仪器和设备,4.3.1 高效液相色谱仪(配荧光检测器),4.3.2 冷冻离心机,4.3.3 分析天平(感量0.000 1 g),4.3.4 旋涡振荡器,4.3.5 恒温水浴锅,4.3.6 微孔滤膜(0.45卩m),4.4 测定步骤,4.4.1 试样的制备,试样的制备包括:,ーー取新鲜或室温下解冻后的牛奶,以3 500 r/min离心10 min,取下层液作为供试试样;,——取新鲜或室温下解冻后的空白牛奶,以3 500 r/min离心10 min,取下层液作为空白试样;,——取空白试样,添加适宜浓度的标准工作溶液作为空白添加试样,4.4.2 提取,精密量取试样5.0 mレー10 mL,置于塑料离心管中,加入三氯乙酸水溶液(750 mg/mL)0.5 mL ±,0.01 mL,盖紧后剧烈振摇30 s0然后,以6 50() r/min的速度离心10 min,量取上清液1 mL ±0.01 mL,于10 mL螺口刻度离心管中O,4.4.3 衍生化,在盛有!.0 mL离心上清液或标准工作液的10 mL螺口刻度离心管中,加入三氯乙酸水溶液(200,mg/mL)0.2mし和7%中醛溶液0.2 mL,旋涡混匀20 s,加盖拧紧后置于沸水浴中加热30 min〇取出,冷却至室温,用20%乙月青水溶液定容至2 mL,混匀后,经0.45 Mm微孔滤膜滤过至样品瓶中,供高效液,相色谱分析:,4.4.4 测定,4.4.4.1 色谱条件,色谱柱:。堡,250 mmX 4.6 mm(i.d.),粒径5むm,或相当者;,流动相:磷酸盐缓冲液ー乙睛(75 + 25 , ロん，);,ソ朮速:1 mL/min;,つ,NY/T 829—2004,荧光检测器:激发波长346 nm.发射波长422 nm;,进样量:1 〇〇むし,4.4.4.2 测定法,取适量试样溶液和相应浓度的标准工作液，进行单点或多点校准,以色谱峰面积积分值定量,标准,工作液及试样溶液中的氨节青霉素的响应值应在仪器检测的线性范围之内,在上述色谱条件下,氨苇,青霉素的保留时间在8.3 min左右,标准溶液液相色谱图见附录ハ中图A……
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